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培養(yǎng)基的主要成分及功能介紹

日期:2024-09-21 16:48
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摘要:
   培養(yǎng)基的成分主要可以分水、無機鹽、有機物、天然復合物、培養(yǎng)體的支持材料等五大類。
   1水是植物原生質體的組成成分,也是一切代謝過程的介質和溶媒。它是生命活動過程中不可缺少的物質。配制培養(yǎng)基母液時要用蒸餾水,以保持母液及培養(yǎng)基成分的**性,防止貯藏過程發(fā)霉變質。大規(guī)模生產時可用自來水。但在少量研究上盡量用蒸餾水,以防成分的變化引起**效果。
   2無機元素(inorganic element)大量元素,指濃度大于0.5mmol/L的元素等。其作用是:
  (1)N 是蛋白質、酶、葉綠素、維生素、核酸、磷脂、生物堿等的組成成分,是生命不可缺少的物質。在制備培養(yǎng)基時以NO3—N和NH4—N兩種形式供應。大多數(shù)培養(yǎng)基既含有N03—N又含NH4—N。NH4—N對植物生長較為有利。供應的物質有KNO3、NH4NO3等。有時,也添加氨基酸來補充氮素。
  (2)P 是磷脂的主要成分。而磷脂又是原生質、細胞核的重要組成部分。磷也是ATP、ADP等的組成成分。在植 物組織培養(yǎng)過程中,向培養(yǎng)基內添加磷,不僅增加養(yǎng)分、提供能量,而且也促進對N的吸收,增加蛋白質在植物體中的積累。常用的物質有KH2P04或NaH2P04等。
  (3)K 對碳水化合物合成、轉移、以及氮素代謝等有密切關系。K增加時,蛋白質合成增加,維管束、纖維組織發(fā)達,對胚的分化有促進作用。但濃度不易過大,一般為1—3mg/L為好。制備培養(yǎng)基時,常以KCI、KN03等鹽類提供。
  (4)Mg、S和Ca、Mg 是葉綠素的組成成分,又是激酶的活化劑;S是含S氨基酸和蛋白質的組成成分。它們常以MgSO4?7H20提供。用量為1—3mg/l較為適宜;Ca是構成細胞壁的一種成分,Ca對細胞分裂、保護質膜不受破壞有顯著作用,常以CaCl2?2H2O提供。 微量元素 指小于0.5mmol/L的元素,F(xiàn)e,B,Mn,Cu,Mo,Co等。鐵是一些氧化酶、細胞色素氧化酶、過氧化氫酶等的組成成分。同時,它又是葉綠素形成的必要條件。培養(yǎng)基中的鐵對胚的形成、芽的分化和幼苗轉綠有促進作用。在制做培養(yǎng)基時不用Fe2SO4,和FeCl3(因其在pH值5.2以上,易形成Fe(OH)3的不溶性沉淀),而用FeSO4?7H20和Na2—EDTA結合成合物使用。B,Mn,Zn,Cu,Mo,Co等,也是植物組織培養(yǎng)中不可缺少的元素,缺少這些物質會導致生長、發(fā)育異?,F(xiàn)象。
3有機化合物(organic compound)
   培養(yǎng)基中若只含有大量元素與微量元素,常稱為基本培養(yǎng)基(basic medium)。為不同的培養(yǎng)目的往往要加入一些有機物以利于快速生長。常加入的有機成分主要有以下幾類:
   碳水化合物 *常用的碳源是蔗糖,葡萄糖和果糖也是較好的碳源,可支持許多組織很好的生長。麥芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖在組織培養(yǎng)中也有應用。蔗糖使用濃度在2%—3%,常用3%,即配制一升培養(yǎng)基稱取30g蔗糖,有時可用2.5%,但在胚培養(yǎng)時采用4%-15%的高濃度,因蔗糖對胚狀體的發(fā)育起重要作用。
不同糖類對生長的影響不同。從各種糖對水稻根培養(yǎng)的影響來看,以葡萄糖****,果糖和蔗糖相當,麥芽糖差一些。不同植物不同組織的糖類需要量也不同,實驗時要根據(jù)配方規(guī)定按量稱取,不能任意取量。高壓滅菌時,一部分糖會發(fā)生分解,制定配方時要給予考慮。在大規(guī)模生產時,可用食用的綿白糖代替。維生素(vitamin) 這類化合物在植物細胞里主要是以各種輔酶的形式參與多種代謝活動,對生長、分化等有很好的促進作用。雖然大多數(shù)的植物細胞在培養(yǎng)中都能合成所必需的維生素,但在數(shù)量上,還明顯不足,通常需加入一至數(shù)種維生素,以便獲得*良好的生長。主要有VBl(鹽酸硫胺素)、VB6(鹽酸吡哆醇)、Vpp(煙酸)、Vc(抗壞血酸)、有時還使用生物素、葉酸、VB12等。一般用量為0.1—1.0mg/L。有時用量較高。VB1對愈傷組織的產生和生活力有重要作用,VB6能促進根的生長,Vpp與植物代謝和胚的發(fā)育有一定關系。Vc有防止組織變褐的作用。
   肌醇 (myo—inosltol)又叫環(huán)己六醇,在糖類的相互轉化中起重要作用。通??捎闪姿崞咸烟寝D化而成,還可進一步生成果膠物質,用于構建細胞壁。肌醇與6分子磷酸殘基相結合形成植酸,植酸與鈣、鎂等陽離子結合成植酸鈣鎂,植酸可進一步形成磷脂,參與細胞膜的構建。使用濃度一般為lOOmg/L,適當使用肌醇,能促進愈傷組織的生長以及胚狀體和芽的形成。對組織和細胞的繁殖、分化有促進作用,對細胞壁的形成也有作用。
   氨基酸(almino acide) 是很好的有機氮源,可直接被細胞吸收利用。培養(yǎng)基中*常用的氨基酸是甘氨酸,其他的如精氨酸、谷氨酸,谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。有時應用水解乳蛋白或水解酪蛋白,它們是牛乳用酶法等加工的水解產物,是含有約20種氨基酸的混合物,用量在10-1000mg/L之間。由于它們營養(yǎng)豐富,極易引起污染。如在培養(yǎng)中無特別需要,以不用為宜。
   天然復合物其成分比較復雜,大多含氨基酸、激素、酶等一些復雜化合物。它對細胞和組織的增殖與分化有明顯的促進作用,但對器官的分化作用不明顯。它的成分大多不清楚,所以一般應盡量避免使用。 1)椰乳 是椰子的液體胚乳。它是使用*多、效果*大的一種天然復合物。一般使用濃度在10%—20%,與其果實成熟度及產地關系也很大。它在愈傷組織和細胞培養(yǎng)中有促進作用。在馬鈴薯莖尖分生組織和草莓微莖尖培養(yǎng)中起明顯的促進作用,但莖尖組織的大小若超過1nun時,椰乳就不發(fā)生作用。
  2)香蕉 用量為150-200ml/L。用黃熟的小香蕉,加入培養(yǎng)基后變?yōu)樽仙?。對pH值的緩沖作用大。主要在蘭花的組織培養(yǎng)中應用,對發(fā)育有促進作用。
  3)馬鈴薯(potato) 去掉皮和芽后,加水煮30min,再經(jīng)過過濾,取其濾液使用。用量為150—200g/L。對pH值緩沖作用也大。添加后可得到健壯的植株。
  4)水解酪蛋白 為蛋白質的水解物,主要成分為氨基酸,使用濃度為100—200mg/L。受酸和酶的作用易分解,使用時要注意。
  5)其他 酵母提取液(YE)(0.01%-0.05%),主要成分為氨基酸和維生素類;麥芽提取液(0.01%~0.5%)、蘋果和番茄的果汁、黃瓜的果實、未熟玉米的胚乳等。遇熱較穩(wěn)定,大多在培養(yǎng)困難時使用,有時有效。
4植物生長調節(jié)物(hormone)
   植物激素是植物新陳代謝中產生的天然化合物,它能以極微小的量影響到植物的細胞分化、分裂、發(fā)育,影響到植物的形態(tài)建成、開花、結實、成熟、脫落、衰老和休眠以及萌發(fā)等許許多多的生理生化活動,在培養(yǎng)基的各成分中,植物生長調節(jié)物是培養(yǎng)基的關鍵物質,對植物組織培養(yǎng)起著決定性作用。

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