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乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基的配制原則

日期:2024-09-21 16:19
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摘要:
   培養(yǎng)細菌、放線菌、酵母菌、霉菌所需要的培養(yǎng)基是不同的。在實驗室中常用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)異養(yǎng)細菌,培養(yǎng)特殊類型的微生物還需特殊的培養(yǎng)基。

   自養(yǎng)型微生物有較強的合成能力,所以培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物的完全由簡單的無機物組成。異養(yǎng)型微生物的合成能力較弱,所以培養(yǎng)基中至少要有一種有機物,通常是葡萄糖。有的異養(yǎng)型微生物需要多種生長因子,因此常采用天然有機物為其提供所需的生長因子。如果為了獲得菌體或作種子培養(yǎng)基用,一般來說,培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分宜豐富些,特別是氮源含量應高些,以利于微生物的生長與繁殖。如果為了獲得代謝產(chǎn)物或用作發(fā)酵培養(yǎng)基,則所含氮源宜低些,以使微生物生長不致過旺而有利于代謝產(chǎn)物的積累。在有些代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)中還要加入作為它們組成部分的元素或前體物質(zhì),如生產(chǎn)維生素B12時要加入鈷鹽,在金霉素生產(chǎn)中要加入氯化物,生產(chǎn)芐青霉素時要加入其前體物質(zhì)***。 營養(yǎng)協(xié)調(diào) 培養(yǎng)基應含有維持微生物*適生長所必須的一切營養(yǎng)物質(zhì)。但更為重要的是,營養(yǎng)物質(zhì)的濃度與配比要合適。營養(yǎng)物質(zhì)濃度過低不能滿足其生長的需要;過高又抑制其生長。例如,適量的蔗糖是異養(yǎng)型微生物的良好碳源和能源,但高濃度的蔗糖則抑制微生物生長。金屬離子是微生物生長所不可缺少的礦質(zhì)養(yǎng)分,但濃度過大,特別是重金屬離子,反而抑制其生長,甚至產(chǎn)生殺菌作用。各營養(yǎng)物質(zhì)之間的配比,特別是碳氮比(C/N比)直接影響微生物的生長繁殖和代謝產(chǎn)物的積累。C/N比一般指培養(yǎng)基中元素碳和元素氮的比值,有時也指培養(yǎng)基中還原糖與粗蛋白的含量之比。不同的微生物要求不同的C/N比。如細菌和酵母菌培養(yǎng)基中的C/N比約為5/1,霉菌培養(yǎng)基中的C/N比約為10/l。

   在微生物發(fā)酵生產(chǎn)中,C/N比直接影響發(fā)酵產(chǎn)量,如谷氨酸發(fā)酵中需要較多的氮作為合成谷氨酸的氮源,若培養(yǎng)基C/N比為4/1,則菌體大量繁殖,谷氨酸積累少;若培養(yǎng)基C/N比為3/1,則菌體繁殖受抑制,谷氨酸產(chǎn)量增加。此外,還須注意培養(yǎng)基中無機鹽的量以及它們之間的平衡;生長因子的添加也要注意比例適當,以保證微生物對各生長因子的平衡吸收。 理化適宜 微生物的生長與培養(yǎng)基的pH值、氧化還原電位、滲透壓等理化因素關系密切。

   配制應將這些因素控制在適宜的范圍內(nèi)。

   1. pH值 各大類微生物一般都有其生長適宜的pH范圍。如細菌為7.0~8.0,放線菌為7.5~8.5,酵母菌為3.8~6.0,霉菌為4.0~5.8,藻類為6.0~7.0,原生動物為6.0~8.0。但對于某一具體的微生物菌種來說,其生長的*適pH范圍常會大大突破上述界限,其中一些嗜極菌更為突出。微生物在生長、代謝過程中,會產(chǎn)生改變培養(yǎng)基pH的代謝產(chǎn)物,若不及時控制,就會抑制甚至殺死其自身。因此,在設計此類培養(yǎng)基時,要考慮培養(yǎng)基成分對pH的調(diào)節(jié)能力。這種通過內(nèi)在成分所起的調(diào)節(jié)作用,可稱為pH的內(nèi)源調(diào)節(jié)。
   內(nèi)源調(diào)節(jié)主要有2種方式:①借磷酸緩沖液進行調(diào)節(jié):例如調(diào)節(jié)K2HP04和KH2P04兩者濃度比即可獲得pH6.4~7.2間的一系列穩(wěn)定的pH,當兩者為等摩爾濃度比時,溶液的pH值可穩(wěn)定在6.8。②以CaCO3作“備用堿”進行調(diào)節(jié):CaCO3在水溶液中溶解度很低,故將它加入至液體或固體培養(yǎng)基中并不會提高培養(yǎng)基的pH,但當微生物生長過程中不斷產(chǎn)酸時,卻可以溶解CaCO3,從而發(fā)揮其調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH的作用。如果不希望培養(yǎng)基有沉淀,有時可添加NaHCO3。 與內(nèi)源調(diào)節(jié)相對應的是外源調(diào)節(jié),這是一類按實際需要不斷從外界流加酸或堿液,以調(diào)整培養(yǎng)液pH值的方法。

   2. 氧化還原電位 各種微生物對培養(yǎng)基的氧化還原電位要求不同。一般好氧微生物生長的Eh(氧化還原勢)值為 + 0.3~+ 0.4 V,厭氧微生物只能生長在+ 0.1 V以下的環(huán)境中。好氧微生物必須保證氧的供應,這在大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)中尤為重要,需要采用專門的通氣措施。厭氧微生物則必須除去氧,因為氧對它們有害。所以,在配制這類微生物的培養(yǎng)基時,常加入適量的還原劑以降低氧化還原電位。常用的還原劑有巰基乙酸、半胱氨酸、硫化鈉、抗壞血酸、鐵屑等。也可以用其他理化手段除去氧。發(fā)酵生產(chǎn)上常采用深層靜置發(fā)酵法創(chuàng)造厭氧條件。

   3. 滲透壓和水活度 多數(shù)微生物能忍受滲透壓較大幅度的變化。培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的濃度過大,會使?jié)B透壓太高,使細胞發(fā)生質(zhì)壁分離,抑制微生物的生長。低滲溶液則使細胞吸水膨脹,易破裂。配制培養(yǎng)基時要注意滲透壓的大小,要掌握好營養(yǎng)物質(zhì)的濃度。常在培養(yǎng)基中加入適量的NaCl以提高滲透壓。在實際應用中,常用水活度表示微生物可利用的游離水的含水量。 經(jīng)濟節(jié)約 配制培養(yǎng)基特別是大規(guī)模生產(chǎn)用的培養(yǎng)基時還應遵循經(jīng)濟節(jié)約的原則,盡量選用價格便宜、來源方便的原料。在保證微生物生長與積累代謝產(chǎn)物需要的前提下,經(jīng)濟節(jié)約原則大致有:“以粗代精”、“以野代家”、“以廢代好”、“以簡代繁”、“以烴代糧”、“以纖代糖”、“以氮代朊”、“以國(產(chǎn))代進(口)”等方面。

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