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結(jié)核桿菌培養(yǎng)基的種類及應(yīng)用

日期:2024-09-21 16:35
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摘要:
 自從1882年Koch發(fā)現(xiàn)以來,為促進(jìn)生長,縮短培養(yǎng)時(shí)間,達(dá)到提前分離、鑒定的目的,人們對的營養(yǎng)、生理代謝及人工培養(yǎng)進(jìn)行了一系列的研究,經(jīng)過一個(gè)多世紀(jì)的不懈努力,已經(jīng)對結(jié)核桿菌的生長規(guī)律有了比較深入地了解,并且形成了許多成熟的培養(yǎng)方法。盡管現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)在結(jié)核病研究中發(fā)揮著越來越重要的作用,但是結(jié)核桿菌的培養(yǎng)在結(jié)核病的診斷、流行病學(xué)指標(biāo)、結(jié)核菌的分型鑒定、藥敏試驗(yàn)、結(jié)核病藥物的研究等方面依然有著不可替代的作用。
   1 按培養(yǎng)基的性狀分類 
培養(yǎng)的培養(yǎng)基,從性狀上分重點(diǎn)有、、等類型,這些各有特點(diǎn)。
  1.1 基 *常用的是,也是*具代表性的一種,其他的還有小川辰次(Tatsujiogawa)雞蛋和Middle brook 7H10、7H11等等。在中,由于可以直接觀察菌落的形態(tài)并可做鑒別用,因此常用在臨床標(biāo)本的分離培養(yǎng)、鑒別、保存菌種及對抗結(jié)核藥物的敏感性測定等方面,缺點(diǎn)是結(jié)核菌生長緩慢。
  1.2 常用的有蘇通(Sauton)培養(yǎng)基、Middle brook 7H9等。在中能夠更廣泛的接觸營養(yǎng)成分,因此在液體中生長相對較快,重點(diǎn)在液體表面生長,攪動(dòng)時(shí)下沉至管底,可獲得大量的。重點(diǎn)缺點(diǎn)是:在對臨床標(biāo)本的收集、采樣、運(yùn)輸方面有不利的一面;不能根據(jù)肉眼觀察菌落形態(tài);污染機(jī)會(huì)多,影響的生長,污染時(shí)不易與鑒別,需涂片染色鏡檢判斷是否生長。
  1.3 改良蘇通半流體瓊脂培養(yǎng)基是一種人工綜合,基質(zhì)透明,呈半流體狀態(tài),生長的結(jié)核桿菌形成白色顆粒狀菌落懸浮于中段,便于觀察。
  1.4 Septi-Check AFB雙相培養(yǎng)基是國外應(yīng)用較早的一種[1],采用BD**式封閉式固液雙相一體化培養(yǎng)基設(shè)計(jì)。液相為Middle brook 7H9分枝桿菌專用,可迅速繁殖分枝桿菌,固相為3種平面:Middle brook 7H11和改良的L-J用在及時(shí)將增菌肉湯內(nèi)分枝桿菌進(jìn)行分離純化以獲得單個(gè)菌落,巧克力瓊脂用在早期發(fā)現(xiàn)污染菌,避免時(shí)間浪費(fèi)。由于有液相作為基礎(chǔ),因此結(jié)核桿菌生長較快,也是一種非常有效的。國內(nèi)有用平菇制備的平菇雙相[2]是利用平菇浸出液為基礎(chǔ),加小牛血清、瓊脂等成分而配制的一種培養(yǎng)基,根據(jù)瓊脂的量不同制成液相、固相培養(yǎng)基。在國內(nèi)應(yīng)用較少,重點(diǎn)特點(diǎn)是成本低,制備簡單,適合于基層使用,有一定的研究價(jià)值。
  2 按成分分類 
重點(diǎn)分為以雞卵和瓊脂為基礎(chǔ)的兩種[3]。為了使結(jié)核桿菌達(dá)到快速生長的目的,可加上血液、椰汁、平菇液等不同營養(yǎng)成分,從而配制出各種不同的。
  2.1 以雞卵為基礎(chǔ)的 有L-J、Ogawa、丙酮酸鈉和丙酮酸鈉細(xì)胞色素C培養(yǎng)基等。在雞卵為主的培養(yǎng)基中,雞卵液是關(guān)鍵成分,在制備培養(yǎng)基時(shí),要充分考慮雞卵液的新鮮程度以及營養(yǎng)成分是否受到破壞。
  2.1.1 L-J培養(yǎng)基 是一種經(jīng)典的[4],重點(diǎn)成分有天門冬素、KH2PO4、MgSO4?7H2O、枸櫞酸鎂、甘油、雞卵液等,需要血清凝固器對培養(yǎng)基進(jìn)行凝固,以保證培養(yǎng)基中有一定的凝固水,以滿足長時(shí)間培養(yǎng)的需要。根據(jù)成分種類及劑量的不同,又可分為酸性L-J培養(yǎng)基和堿性L-J培養(yǎng)基。將L-J培養(yǎng)基中KH2PO4的量由2.4g增加為14g,就是酸性L-J培養(yǎng)基,而將KH2PO42.4g改為K2HPO43.6g,就是堿性L-J培養(yǎng)基。L-J培養(yǎng)基制備簡單,重點(diǎn)用在分枝桿菌初次分離培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、菌落觀察、保存菌種、藥物敏感性測定及菌種鑒定等,而酸性L-J培養(yǎng)基和堿性L-J培養(yǎng)基用在分枝桿菌分離培養(yǎng)時(shí),標(biāo)本分別用堿和酸處理。結(jié)核桿菌在L-J培養(yǎng)基上生長時(shí),培養(yǎng)時(shí)間較長,大約在4~8周,因此不利于臨床快速檢測的需求,但作為其他快速診斷的參照,以及作為結(jié)核桿菌診斷的標(biāo)準(zhǔn)有非常重要的意義。
  2.1.2 Ogawa培養(yǎng)基 成分較少,又少了天門冬素,因此是一種比L-J培養(yǎng)基更為經(jīng)濟(jì)的培養(yǎng)基,重點(diǎn)成分有谷氨酸鈉、KH2PO4、甘油、雞卵液等,還可以通過調(diào)整KH2PO4的量及谷氨酸鈉的量制備成改良培養(yǎng)基(Modified Ogawa),此培養(yǎng)基的用途與L-J培養(yǎng)基相同,由于價(jià)廉,特別適合于發(fā)展中國家[5]。
  2.1.3 是在L-J培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入丙酮酸鈉,除去甘油制備而成,重點(diǎn)用在從標(biāo)本中分離牛型分枝桿菌或作為本菌的傳種及保存。而丙酮酸鈉細(xì)胞色素C培養(yǎng)基是在Ogawa培養(yǎng)基基礎(chǔ)上,楊樂蔭等用0.1%丙酮酸鈉代替甘油,并加入2.5%葡萄糖液及細(xì)胞色素C制成丙酮酸鈉細(xì)胞色素C培養(yǎng)基,與丙酮酸鈉培養(yǎng)基、Ogawa培養(yǎng)基對臨床標(biāo)本比較,其培養(yǎng)的培養(yǎng)陽性率*高,顯示了丙酮酸鈉細(xì)胞色素C培養(yǎng)基的優(yōu)越性。
  2.2 以瓊脂為基礎(chǔ)培養(yǎng)基 包括蘇通(Sauton)培養(yǎng)基Middle brook 7H9、7H10、7H11、7H12,匡氏培養(yǎng)基Proskauer培養(yǎng)基和Beck等。這些重點(diǎn)是由無機(jī)鹽類及一系列的有機(jī)化合物等成分組成。瓊脂的作用重點(diǎn)是賦形劑,通過調(diào)整瓊脂的量,一方面可以制備成不同性狀的培養(yǎng)基;另一方面,在中的少量瓊脂有利于結(jié)核桿菌在中段形成菌落,從而便于觀察。
  2.2.1 Sauton培養(yǎng)基[6] 重點(diǎn)成分有天門冬素、K2HPO4、MgSO4?7H2O、檸檬酸、枸櫞酸鐵銨、甘油等,根據(jù)是否加入瓊脂及瓊脂的量,又形成了及(也稱改良蘇通半流體培養(yǎng)基)等。在的制備上,也不需要特殊的設(shè)備,通過高壓滅菌法既可處理,因此操作簡單,重點(diǎn)用在牛型分枝桿菌的培養(yǎng),卡介苗的生產(chǎn)及***對結(jié)核桿菌的作用的研究中。
  2.2.2 Middle brook系列 是國外*常用在結(jié)核桿菌研究和診斷目的的之一,從成分上看,*大的特點(diǎn)是成分多、配制復(fù)雜[6],但是培養(yǎng)時(shí)間短,因此越來越受到國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注,其中7H9、7H12為,7H10、7H11為。通過在中加入標(biāo)記14C的棕櫚酸,當(dāng)有分枝桿菌生長時(shí),就可利用中的標(biāo)記物而產(chǎn)生有放射性14CO2,然后由BACTE TB 460監(jiān)測切換器檢測其含量,因此非常敏感。Middle brook系列培養(yǎng)基重點(diǎn)用在分枝桿菌培養(yǎng)及藥物敏感性的測定。
  2.2.3 Proskauer和Beck 使用簡便,但是菌落不典型,呈扁平狀、露滴狀,多為光滑型。

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