1、掌握細(xì)菌分離培養(yǎng)方法
   2、掌握細(xì)菌的移植方法。
   3、學(xué)會(huì)對(duì)細(xì)菌各種培養(yǎng)性狀的觀察。
材質(zhì)準(zhǔn)備：
   1．器材：培養(yǎng)箱、接種環(huán)、酒精燈、滅菌吸管、滅菌平皿等。
   2．試劑：焦性沒(méi)食子酸、連二亞硫酸鈉、碳酸氫鈉、10%氫氧化鈉或氫氧化鉀、凡士林、生理鹽水等。
   3．培養(yǎng)基：普通肉湯、普通瓊脂平板、普通瓊脂斜面、半固體培養(yǎng)基、肝片肉湯厭氧培養(yǎng)基。
   4．材質(zhì)：病料及細(xì)菌培養(yǎng)物。
方法步驟:
一．細(xì)菌的培養(yǎng)法
(一)細(xì)菌的分離培養(yǎng)
   1、劃線分離法 將病料或細(xì)菌培養(yǎng)物在瓊脂平板上連續(xù)劃線，以獲得獨(dú)立的單個(gè)菌落，便于對(duì)菌落性狀的觀察，對(duì)分離的細(xì)菌作出初步的鑒定。
方法如下：
  (1)右手持接種環(huán)于酒精燈上燒灼滅菌，待冷。
  (2)無(wú)菌操作取病料，用滅菌的接種環(huán)鉤取病料或待分離的細(xì)菌一環(huán)。
  (3)左手持平皿，用拇指、食指及中指將皿蓋打開(kāi)，角度小為佳，以免空氣中細(xì)菌污染培養(yǎng)基。
  (4)接種環(huán)伸入平皿，將取得的材質(zhì)涂于培養(yǎng)基邊緣，將接種環(huán)上多余的細(xì)菌灼燒掉，然后自涂抹處成30～40°角，在平板表面進(jìn)行分區(qū)劃線或連續(xù)劃線。
  (5)劃線完畢，燒灼接種環(huán)，將培養(yǎng)皿蓋好，用記號(hào)筆在培養(yǎng)皿底部注明被檢材質(zhì)及日期，倒置37℃溫箱中培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果。
   2．傾注培養(yǎng)法 將液體被檢材質(zhì)或稀釋后的被檢材質(zhì)與冷卻至50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基直接混合，培養(yǎng)后觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。本法適用于檢查病畜血液、尿液、牛奶及飲水中的活菌數(shù)。
  （1）根據(jù)待檢材質(zhì)中菌數(shù)的多少，用普通肉湯或生理鹽水對(duì)其進(jìn)行10-1、10-2、10-3…稀釋。
  （2）分別用滅菌的吸管吸取各稀釋度的檢樣1ml加入到無(wú)菌平皿中。
  （3）取充分溶化后冷卻至50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基分別傾入各平皿內(nèi)，搖勻，平放，待其凝固后倒置37℃溫箱中培養(yǎng)。
  （4）統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)，即為每毫升待檢材質(zhì)中的活菌數(shù)。
（二）細(xì)菌的增菌培養(yǎng)
   將病料接種于液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)稱為增菌培養(yǎng)。本法適用于含菌較少的病料。當(dāng)被檢病料中含菌很少時(shí)，為增加分離培養(yǎng)成功的機(jī)會(huì)，先進(jìn)行增菌培養(yǎng)，然后取培養(yǎng)液作劃線分離培養(yǎng)。
（三）細(xì)菌的純培養(yǎng)
   鉤取平板培養(yǎng)基上孤立生長(zhǎng)的一個(gè)菌落或菌種管中的菌苔，移種到另一培養(yǎng)基中，長(zhǎng)出的細(xì)菌為純種。本法適用于純化細(xì)菌和移種純菌，使其增殖后進(jìn)行鑒定或保存菌種。
（四）細(xì)菌的移植
   1．斜面移植
  (1)左手持菌種管及瓊脂斜面管，兩管口齊并，管身略傾斜，斜面向上，管口靠近火焰。
  (2)接種環(huán)在酒精上燒灼滅菌。
  (3)將斜面管及菌種管的二棉塞一起拔出。
  (4)把滅菌接種環(huán)伸入菌種管內(nèi)，鉤取少量菌苔將其立即伸入斜面培養(yǎng)基底部，由下而上在斜面上做蛇行狀劃線，然后管口和棉塞通過(guò)火焰后塞好，接種環(huán)燒灼滅菌。
  (5)在斜面管口寫(xiě)明菌種名稱、日期，置37℃溫箱培養(yǎng)18～24小時(shí)，觀察。
   2．肉湯移植 鉤取瓊脂平板上的單個(gè)菌落或菌種管中的菌苔移植到肉湯培養(yǎng)基中。
   3．從平板移植到斜面 無(wú)菌操作打開(kāi)平皿蓋，以滅菌接種環(huán)鉤取少許菌落移于斜面管，方法同上。
   4．穿刺接種培養(yǎng)法 用接種針鉤取菌落，于瓊脂高層、半固體培養(yǎng)基、明膠培養(yǎng)基表面中心垂直刺入管底，然后由原路線退出接種針。